構(gòu)建酵母多基因表達(dá)系統(tǒng)時，你是否面臨這些挑戰(zhàn)：啟動子/終止子活性不穩(wěn)定，重復(fù)實驗耗時耗材？多片段組裝效率低，Gibson克隆成本居高不下？實驗室間元件不兼容，合作研究難以標(biāo)準(zhǔn)化？

酵母基因組裝不用“東拼西湊”，一起來看看這個“基因組裝神器”—MoClo-YTK模塊化酵母克隆工具包!

MoClo-YTK如何成為實驗室“基因組裝神器”？

MoClo-YTK（Modular Cloning Yeast ToolKit）是一種專為酵母設(shè)計的模塊化克隆工具包，用于高效、靈活地組裝多基因遺傳回路或代謝通路。它結(jié)合了Golden Gate Assembly的高效拼接方法和標(biāo)準(zhǔn)化模塊的設(shè)計理念，極大地簡化了復(fù)雜多基因構(gòu)建的流程。

該工具包含有一組96 個已驗證的高活性啟動子、終止子、篩選標(biāo)記等標(biāo)準(zhǔn)化元件，確保基因表達(dá)穩(wěn)定性和可重復(fù)性。其可用于自下而上分層組裝單基因和多基因構(gòu)建體，供釀酒酵母表達(dá)；其設(shè)計也兼容基于重組的克隆，如酵母體內(nèi)組裝、獨立連接克?。⊿LIC）或Gibson組裝。按標(biāo)準(zhǔn)流程，可在三天內(nèi)從 PCR 模板構(gòu)建多基因質(zhì)粒。MoClo-YTK廣泛適用于合成生物學(xué)研究、酵母基因組工程、代謝通路優(yōu)化、多基因表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建等領(lǐng)域。

MoClo-YTK 核心特點？

模塊化構(gòu)建：所有元件遵循BglBrick標(biāo)準(zhǔn)，兼容國際合成生物學(xué)通用格式（如MoClo、GoldenBraid），支持跨實驗室元件共享。開放架構(gòu)設(shè)計，用戶可靈活添加自定義元件或接入第三方工具（如Tom Ellis實驗室的MYT升級工具包）。

Golden Gate Assembly 技術(shù)：基于Golden Gate技術(shù)，單次反應(yīng)可完成多片段（5-10個）組裝，成功率>90%，實驗周期縮短50%以上。

酵母優(yōu)化：模塊針對酵母表達(dá)系統(tǒng)優(yōu)化，包含酵母特異的啟動子（如 TEF1、GAL1）、終止子、篩選標(biāo)記（如 URA3、HIS3）等。支持單拷貝或多拷貝整合到酵母基因組，或作為游離型質(zhì)粒維持。

全流程驗證：每個DNA元件均經(jīng)過啟動子強度、終止子效率、篩選標(biāo)記穩(wěn)定性等實驗驗證。

可擴展性強：用戶可根據(jù)需求自定義和擴展模塊，增加新的調(diào)控元件、代謝途徑等。與植物（MoClo-Plant）、哺乳動物細(xì)胞等其他MoClo系統(tǒng)兼容，便于跨物種研究。

低成本兼容性：適配常規(guī)實驗室設(shè)備，普通PCR儀、電泳裝置即可完成實驗，無需特殊儀器，試劑耗材成本較傳統(tǒng)Gibson組裝法降低70%。

基于 MoClo 的標(biāo)準(zhǔn)化分層裝配策略

（圖片來源https://pubs.acs.org/doi/10.1021/sb500366v）

MoClo-YTK如何賦能研究？

MoClo-YTK作為先進的酵母模塊化克隆工具包，通過"標(biāo)準(zhǔn)化元件庫+高效Golden Gate組裝"的技術(shù)組合，正在革命性地推動前沿研究領(lǐng)域的發(fā)展。

合成生物學(xué)：構(gòu)建復(fù)雜基因回路

在合成生物學(xué)領(lǐng)域，該工具包使復(fù)雜基因回路的構(gòu)建周期縮短70%：以重金屬生物傳感器為例，研究人員僅用3天就完成了包含響應(yīng)元件、阻遏蛋白和報告基因的AND邏輯門組裝，而傳統(tǒng)方法需要2周以上，相關(guān)成果已發(fā)表于《ACS Synthetic Biology》（2018）。

代謝工程：高效優(yōu)化產(chǎn)物合成途徑

代謝工程應(yīng)用則展現(xiàn)出更驚人的提升，通過預(yù)驗證的啟動子庫精準(zhǔn)調(diào)控代謝流，β-胡蘿卜素生產(chǎn)菌株的產(chǎn)量提升3-5倍，達(dá)到工業(yè)化生產(chǎn)要求的1.2g/L（《Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology》，2020）。

MoClo-YTK是高效的模塊化酵母克隆工具包，基于Golden Gate技術(shù)實現(xiàn)高成功率多基因組裝。包含96個標(biāo)準(zhǔn)化元件，適用于代謝通路優(yōu)化、酵母工程與合成生物學(xué)研究，兼容多種克隆方法，支持快速構(gòu)建與低成本應(yīng)用。這些突破性進展與MoClo-YTK兩大核心技術(shù)優(yōu)勢密不可分：其一，96個已驗證標(biāo)準(zhǔn)化元件（涵蓋10種強度啟動子、8種低泄露終止子）確保實驗可重復(fù)性；其二，Golden Gate組裝技術(shù)實現(xiàn)5-10個片段的一步拼接，成功率>90%。該工具包已獲得全球近600篇學(xué)術(shù)文獻引用，并被多家生物技術(shù)企業(yè)用于加速合成生物學(xué)、生藥物開發(fā)進程，充分驗證了其在基礎(chǔ)研究和產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)化中的雙重價值。

MoClo-YTK 模塊化酵母克隆工具包詳情

注：生物資源類業(yè)務(wù)屬于公益共享，我們銷售的不是菌種所有權(quán)，菌種屬于專利所有者，使用者僅可用于做科學(xué)研究，不可做其他用途。產(chǎn)品標(biāo)價均為培養(yǎng)服務(wù)費

更多MoClo-YTK工具包詳情
請掃碼咨詢

Reference：

1. Lee ME, DeLoache WC, Cervantes B, Dueber JE. A Highly Characterized Yeast Toolkit for Modular, Multipart Assembly. ACS Synth Biol. 2015 Sep 18;4(9):975-86. doi:10.1021/sb500366v. Epub 2015 May 1. PMID: 25871405.

2. Engler C, Kandzia R, Marillonnet S. A one pot, one step, precision cloning method with high throughput capability. PLoS One. 2008;3(11):e3647. doi:10.1371/journal.pone.0003647. Epub 2008 Nov 5. PMID: 18985154

3. Anderson JC, Dueber JE, Leguia M, Wu GC, Goler JA, Arkin AP, Keasling JD. BglBricks: A flexible standard for biological part assembly. J Biol Eng. 2010 Jan 20;4(1):1. doi: 10.1186/1754-1611-4-1. PMID: 20205762; PMCID: PMC2822740.

4. Ostergaard S, Olsson L, Nielsen J. Metabolic engineering of Saccharomyces cerevisiae. Microbiol Mol Biol Rev. 2000 Mar;64(1):34-50. doi: 10.1128/MMBR.64.1.34-50.2000. PMID: 10704473; PMCID: PMC98985.

5. Laughery MF, Wyrick JJ. Simple CRISPR-Cas9 Genome Editing in Saccharomyces cerevisiae. Curr Protoc Mol Biol. 2019 Dec;129(1):e110. doi: 10.1002/cpmb.110. PMID: 31763795; PMCID: PMC6986324.

6. Kim HJ, Jeong H, Lee SJ. Synthetic biology for microbial heavy metal biosensors. Anal Bioanal Chem. 2018 Feb;410(4):1191-1203. doi: 10.1007/s00216-017-0751-6. Epub 2017 Nov 28. PMID: 29184994.

7. Buli Su, Dandan Song, Fan Yang, Honghui Zhu, Engineering a growth-phase-dependent biosynthetic pathway for carotenoid production in Saccharomyces cerevisiae, Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, Volume 47, Issue 4-5, 1 May 2020, Pages 383–393, doi.org/10.1007/s10295-020-02271-x

8. Ryan OW, Poddar S, Cate JH. CRISPR-Cas9 Genome Engineering in Saccharomyces cerevisiae Cells. Cold Spring Harb Protoc. 2016 Jun 1;2016(6). doi: 10.1101/pdb.prot086827. PMID: 27250940.