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精準(zhǔn)突變文庫(kù):定向進(jìn)化的“高效引擎”

發(fā)布時(shí)間:2024-04-29

前言

分子定向進(jìn)化是利用現(xiàn)代分子生物學(xué)方法,人為模擬自然進(jìn)化機(jī)制,人工合成大量的突變同源基因文庫(kù)。采用靈敏的定向篩選策略,創(chuàng)造出自然界不存在的或某些特性有顯著改變的突變蛋白質(zhì)或其他生物分子。



01

精準(zhǔn)突變文庫(kù)類型


精準(zhǔn)突變文庫(kù),融合了基因合成、基因突變和定向進(jìn)化研究的精華。它通過(guò)改變蛋白質(zhì)的特定位點(diǎn)或DNA的調(diào)控區(qū)域,來(lái)研究結(jié)構(gòu)和功能之間的關(guān)系。突變文庫(kù)的主要類型包括:


丙氨酸掃描文庫(kù)

Alanine Scan Library


實(shí)現(xiàn)全面突變覆蓋的高級(jí)策略

利用丙氨酸體積小同時(shí)對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)影響較小的特性,科學(xué)家通過(guò)丙氨酸系統(tǒng)地取代其他19個(gè)氨基酸殘基的每一個(gè),構(gòu)建了丙氨酸掃描文庫(kù)。這種創(chuàng)新方法通過(guò)探索單個(gè)氨基酸殘基在蛋白質(zhì)功能、活性位點(diǎn)和穩(wěn)定性中的作用,解開(kāi)了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的秘密。


定點(diǎn)飽和突變文庫(kù)

Site-Saturation Mutagenesis Library


實(shí)現(xiàn)單點(diǎn)氨基酸的精確突變

將蛋白序列限定區(qū)域內(nèi)的氨基酸位點(diǎn)突變成另外的19種氨基酸,構(gòu)成定點(diǎn)飽和突變文庫(kù)。一次只突變一個(gè)氨基酸位點(diǎn),每條序列和模板相比只存在一個(gè)氨基酸位點(diǎn)突變。這可以大幅降低引物合成成本,對(duì)于突變位點(diǎn)多的高庫(kù)容文庫(kù)極具優(yōu)勢(shì)。

組合突變文庫(kù)

Combinatorial Mutagenesis Library


實(shí)現(xiàn)多點(diǎn)多種氨基酸的精確突變

將蛋白序列的限定區(qū)域內(nèi)連續(xù)的幾個(gè)氨基酸位點(diǎn)同時(shí)突變成另外的19種氨基酸,構(gòu)成組合突變文庫(kù)。同時(shí)突變多個(gè)氨基酸位點(diǎn),每條序列和模板相比存在多個(gè)氨基酸位點(diǎn)突變。為研究復(fù)雜蛋白結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系以及進(jìn)行蛋白工程、抗體研究提供了強(qiáng)大的實(shí)驗(yàn)工具。



02

精準(zhǔn)突變文庫(kù)構(gòu)建流程


精確突變庫(kù)旨在為研究人員提供高度精確的基因突變資源。根據(jù)設(shè)計(jì)目的不同,體外合成的精準(zhǔn)突變文庫(kù)可以更精確、更隨意地控制所研究序列的多樣性,有助于深入探究基因功能和調(diào)控機(jī)制。基于芯片構(gòu)建精準(zhǔn)突變文庫(kù)的流程如下:



  1. 通過(guò)芯片引物引入突變。
  2. 對(duì)樣品中的DNA進(jìn)行大量PCR擴(kuò)增。
  3. 將dsDNA片段無(wú)縫組裝到質(zhì)粒上。
  4. 對(duì)得到的突變文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證及數(shù)據(jù)分析。


03

精準(zhǔn)突變文庫(kù)的應(yīng)用領(lǐng)域


定向進(jìn)化研究:構(gòu)建突變文庫(kù)有助于探索基因的功能和調(diào)控機(jī)制,推動(dòng)基礎(chǔ)科學(xué)研究的進(jìn)展。


酶工程改造:用于改良酶的催化性能和微生物的代謝途徑,為酶工程提供高效、精準(zhǔn)的生物工具。


生物醫(yī)藥領(lǐng)域:用于篩選藥物靶點(diǎn)的關(guān)鍵功能區(qū)域,發(fā)現(xiàn)與疾病相關(guān)的新藥物靶點(diǎn),促進(jìn)新藥開(kāi)發(fā)和研究。


農(nóng)業(yè)領(lǐng)域:有助于篩選具有改良性狀的抗體、配體及受體,提高作物產(chǎn)量、抗病性和適應(yīng)性。


食品領(lǐng)域:針對(duì)食品中存在的特定蛋白質(zhì)進(jìn)行定向進(jìn)化,改善其功能性和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,有助于提升食品的品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)水平。





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合成生物學(xué)賦能技術(shù)平臺(tái)




泓迅生物依托領(lǐng)先設(shè)計(jì)和先進(jìn)制造成功交付了數(shù)百個(gè)高質(zhì)量、定制庫(kù)化的精準(zhǔn)突變文庫(kù)。我們根據(jù)您的需求,精心設(shè)計(jì)并合成各種DNA精準(zhǔn)突變文庫(kù),為您提供定制化基因突變文庫(kù)解決方案。


服務(wù)優(yōu)勢(shì)

序列控制精準(zhǔn)

合成效率高

高度定制化

高性價(jià)比方案


泓迅案例


NNK文庫(kù)是一種經(jīng)典的簡(jiǎn)并突變文庫(kù),所使用的 NNK簡(jiǎn)并引物包含了32(4x4x2)種密碼子組合(N= A/C/G/T, K= G/T),覆蓋了所有20種氨基酸,可以將任意位點(diǎn)的氨基酸進(jìn)行飽和突變。

NNK文庫(kù),5個(gè)NNK位點(diǎn)所包含的每種密碼子的比例


References

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